Rumah John Knox dibangun pada tahun 1470, menjadikannya bangunan abad pertengahan asli tertua yang masih ada di Royal Mile. Rumah ini dikaitkan dengan salah satu masa paling menarik dan penuh gejolak dalam sejarah Skotlandia – Reformasi Skotlandia – yang menyebabkan pecahnya Perang Saudara dan turun takhta Mary, Ratu Skotlandia; Meskipun John Knox tetap tinggal di rumah ini untuk waktu yang singkat sebelum kematiannya pada tahun 1572, hubungannya dengan rumah tersebutlah yang menyelamatkan rumah tersebut dari pembongkaran pada tahun 1840-an.